戴安離子色譜是液相色譜的一種,主要用于陰離子、陽(yáng)離子的分析。對難以用其他儀器和方法分析的常見(jiàn)陰離子、陽(yáng)離子、有機酸和有機胺類(lèi)等組分的分析,離子色譜法也具有選擇性好,靈敏、快速、簡(jiǎn)便,同時(shí)測定多組分的優(yōu)點(diǎn)。
戴安離子色譜的重要的部件是分離柱。柱管材料應是惰性的,一般均在室溫下使用。分離柱的填料由基質(zhì)和功能基兩部分組成。作為填料的基質(zhì)可分為有機聚合物基質(zhì)和無(wú)機(硅膠、氧化鋁)基質(zhì)兩大類(lèi)。其中有機聚合物離子交換樹(shù)脂應用較廣,是目前商品化分離柱的主要填料。高性能分離柱的有效性,是離子色譜發(fā)展的關(guān)鍵。
戴安離子色譜柱是指離子交換色譜中的固定相中的一些帶電荷的基團, 這些帶電基團通過(guò)靜電相互作用與帶相反電荷的離子結合。如果流動(dòng)相中存在其他帶相反電荷的離子,按照質(zhì)量作用定律,這些離子將與結合在固定相上的反離子進(jìn)行交換。
戴安離子色譜柱基本原理:
戴安離子色譜柱是蛋白純化技術(shù)中常用的一種純化方法,其原理是指被分離物質(zhì)所帶的電荷可與離子交換劑所帶的相反電荷結合,這種帶電分子與固定相之間的結合作用是可逆的,在改變pH或者用逐漸增加離子強度的緩沖液洗脫時(shí),離子交換劑上結合的物質(zhì)可與洗脫液中的離子發(fā)生交換而被洗脫到溶液中。由于不同物質(zhì)的電荷不同,其與離子交換劑的結合能力也不同,所以被洗脫到溶液中的順序也不同,從而被分離出來(lái)。
戴安離子色譜柱的再生方法有兩種:
(1) 先用25ml蒸餾水通過(guò)柱子以除去緩沖鹽類(lèi),再用25ml甲醇沖洗,以除去由于分配效應而殘存在骨架中的雜質(zhì),再用25ml 蒸餾水除去不溶于甲醇的殘存鹽類(lèi),后用緩沖液平衡。
(2) 先用0.1mol/L的檸檬酸洗滌,然后用水洗滌(不要用堿性溶液,以防硅膠基質(zhì)溶解),后用緩沖液平衡。