免疫親和柱是利用抗原抗體特異性可逆結合特性的SPE技術(shù),根據抗原抗體的高選擇性,從復雜的待測樣品中提取目標化合物。
免疫親和層析常見(jiàn)的用途是純化重組蛋白。免疫親和層析是從粗混合物中純化蛋白質(zhì)或核酸理想選擇。如果蛋白質(zhì)的分子量,疏水性,電荷等未知,親和色譜法仍可適用于這種情況。一個(gè)典型例子是嘗試分離具有特定活性的酶時(shí),可以用與所選底物相似或相同的連接配體構建親和柱。
免疫親和柱的使用要點(diǎn):
1、上柱的樣品溶液應該保持酸堿中性、無(wú)懸浮物、甲醇濃度不宜過(guò)高;
2、若樣品為復雜樣品,例如高蛋白、高油脂、酸性樣品,可以將提取液分兩次提取樣品,可以提高提取效果;
3、樣品過(guò)柱及甲醇洗脫速度要慢且均勻,約每秒1-2滴;
4、抗原抗體發(fā)生反應的最佳溫度是在25℃左右,實(shí)驗需要的環(huán)境溫度最好是室溫24℃-28℃,太高或太低的溫度都會(huì )對回收率有一定的影響。在使用前需要恢復至室溫再進(jìn)行實(shí)驗;
5、不要在無(wú)水狀態(tài)下,瓊脂容易干燥萎縮,影響質(zhì)量;
6、儲存條件為4℃-8℃。切記0℃以下的低溫,因為緩沖液凍結,會(huì )嚴重影響親和柱內的物理結構,對質(zhì)量影響很大;
7、洗脫一般選擇試劑甲醇,為增強洗脫效果可加大甲醇體積;
8、樣液免疫凈化后,洗脫液過(guò)0.45um或更小孔徑濾膜效果更好。